DNS法,即3,5-二硝基
水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)比色法,是以比色法测还原糖的一种基本方法。还原糖的测定是糖含量测定的基本方法,测定方法有滴定法和比色法两大类。DNS法测还原糖以其检测浓度范围较宽,方法简便,便于还原糖大批量测定而得以普遍应用。
该法原理是在
氢氧化钠存在下(碱性条件),还原糖与DNS共热后被氧化生成
糖酸,DNS则被还原为
氨基化合物(3-氨基-5-硝基水杨酸),在过量的碱性溶液中该化合物呈棕红色,在540nm波长处有最大吸收峰。在一定的浓度范围内,还原糖的量与吸光度值呈线性关系,故利用比色法可测定样品中还原糖的含量。因其显色的深浅只与
糖类游离出还原基团的数量有关,而对还原糖的种类没有选择性,故DNS方法适合用在
多糖(如
纤维素、
半纤维素和淀粉等)
水解产生的多种还原糖体系中。
DNS因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关,而对还原糖的种类没有选择性,故DNS方法适合用在多糖(如纤维素、半纤维素和淀粉等)水解产生的多种还原糖体系中。
将6.3克3,5-二硝基
水杨酸和262ml 2mol/L
氢氧化钠,加到500ml含有182克
酒石酸钾钠的热水溶液中,再加上5克重
苯酚和5克
亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加水定容到1000ml,即制成DNS试剂,贮于
褐色瓶中放置一周后备用。
分别取
葡萄糖标准液(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中,用蒸馏水补足至1.0ml, 分别准确加入DNS试剂2ml,沸水浴加热2min,流水冷却,用水补足到15ml刻度。在520nm波长下测定吸光度。
样品液适当稀释,使糖浓度为0.1-1.0mg/ml,取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中,加DNS试剂2.0ml,沸水煮沸2min,冷却后用水补足到15ml刻度,在520nm波长下测定吸光度。从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。求出样品中糖含量。