光漂白(Photobleaching,亦称为光致褪色)是
染料或
荧光团分子的光化学变化,使其永久不能发出荧光。这是由于
共价键断裂或荧光团与周围分子之间的非特异性反应。光漂白不仅在显微术中造成观测上的干扰,还可以应用于研究分子运动和分子扩散现象,如FRAP或FLIP技术。
荧光成像的质量很大程度上依赖于荧光信号强度。提高激发光强度可以提高信号强度,但激发光的强度不是可以无限提高的。当激发光的强度超过一定限度时,光吸收就趋于饱和,并不可逆地破坏
激发态分子,这就是光漂白现象。在显微术中,光漂白使得观测变得复杂,因为它会造成破坏,使
荧光团无法继续放光。此现象造成间歇性拍摄光谱(
时间lapse microscopy)观测上的干扰。然而,光漂白也提供了一些应用,例如在quench自发荧光上(主要在antibody-linked),这可以帮助提高
信噪比(signal-to-
噪点 ratio)。
我们可以通过控制光的强度以及照射时间来控制光漂白的现象。或是使用结构较强的荧光团来减少光漂白的现象,例如Alexa Fluors或DyLight Fluors。一个适当让
荧光分子被破坏的方法是固定条件(强度x照射时间x循环次数),因为在固定这些条件下,每次吸收放光循环有相同的光漂白
期望值。
光漂白的生命期取决于物质的不同。不同
染料在不同数量的
光子照射下会有不同的生命期,例如在105 photons/s照射下:
请注意,这里所说的"生命期"与一般在序书
荧光基团的"生命期"并不相同,一般荧光基团的生命期可以参考荧光寿命成像。