3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine)即TMB是一种
脂溶性较强的
基团,因此容易进入
细胞与
细胞器中的HRP反应,且由于这种高度的脂溶性,使其易形成多聚体,在HRP活性部位产生粗大的、深兰色
沉淀物,这使得TMB成为组化实验中的一种很好的
生色团。同时反应产物的沉淀,使得HRP的活性部位更加暴露,利于酶氧化反应进行。
由于上述优点,目前TMB常用于光镜及超微结构水平的HRP及HRP-WGA神经投射的研究。需要注意的是:TMB显色液中的A液和B液应在2h内新鲜配制。另外,TMB是一种较强的皮肤刺激剂,并有致癌的潜在可能,故使用时应带手套及在通风条件下操作。
TMB经HRP作用后
共产主义物显蓝色,目视对比鲜明。TMB性质较稳定,可配成溶液试
优点,因此在ELISA中应用日趋广泛。酶反应用HCL或
硫酸终止后,TMB产物由蓝色呈