上海工人第三次武装起义，即上海工人在中国共产党的领导下举行的第三次武装起义，于1927年3月21日发动，由周恩来担任起义总指挥，起义总指挥部设立在宝山路横滨桥南的商务印书馆职工医院内。

北伐战争开始后，为配合北伐军进军，在中国共产党领导下，上海工人先后举行了两次武装起义，都失败了。随后，又派周恩来织领导上海工人第三次武装起义。起义的行动，以5000多名英雄民兵连队员为先锋，分南市区、闸北区、虹口区等七个区域，同时向敌人发起进攻。第二天晚上6时，起义工人攻占上海北站，消灭了敌人在闸北的最后据点，第三次武装起义取得成功。这次武装起义共有300多位工人牺牲，1000多人负伤。1927年3月22日，上海工商学各界举行市民代表会议，选举19人组成上海特别市临时市政府（即上海市民政府）。

上海工人第三次武装起义是第一次国内革命战争时期中国工人运动的一次壮举，是北伐战争时期工人运动发展的最高峰，为在中国开展城市武装斗争作了大胆的尝试。

在上海工人第二次武装起义失败后，封建军阀李宝章的国民革命军第二十九军大刀队，任意搜捕残杀工人，上海市陷入一片恐怖之中。上海千百万群众因总同盟罢工而高涨的斗争热情，面临严峻的考验。就在这黑云压城，工人武装起义面临两次失败的危难之际，周恩来怀着对封建军阀残酷暴行的强烈愤慨，为夺取武装建立人民自己的政府的使命，担负起领导上海工人第三次武装起义的重任。为了加强对第三次武装起义的领导，2月23日中央和上海区委联席会议决定组织特别委员会，由陈独秀、罗亦农、赵世炎、汪寿华、尹宽、彭述之、周恩来、萧子璋等8人组成，并在特委下面设军事委员会和宣传委员会，作为起义的最高决策和指挥机关。针对前两次起义失败的教训，周恩来特别重视起义前的准备工作。周恩来在被任命为特别军委书记的第二天，就参加了上海区委各部书记联席会议以及召集各区军事专员会议，详细了解了各区英雄民兵连的力量配备，研究了敌方军警的据点和力量分布。

1927年3月21日，上海市工人发动第三次武装起义。武装起义由中共中央军委书记兼江浙区军委书记周恩来任总指挥，同中共江浙区委负责人罗亦农、赵世炎一起负责领导工作。为确保武装起义胜利，上海区委组织5000人的纠察队，秘密进行政治、军事训练。派一部分工人打入敌人的“保卫团”，掌握一部分武器，借敌人的训练和装备，扩大工人纠察队的武装和军事素质。又在市民、特别是贫苦市民中进行广泛细致的政治工作。并根据敌人所在地区力量的强弱，划分了七个作战区域，规定了各区英雄民兵连的任务，将敌人兵力较强的闸北区作为起义进攻的重点区。起义前十天，铁路工人中断了铁路运输，使北洋军阀在上海的警备司令毕庶澄部3000人和当地警察2000人处于孤立无援的境地。

3月21日，中共上海区委于上午9时正式作出发动第三次武装起义的决定。上海市民代表会议常务委员会立即召开紧急会议，决定在中午12时起实行总同盟罢工、罢课、罢市。接着，上海市总工会发布总同盟罢工令。中午12时起，在周恩来等的领导下，上海市80万工人开始罢工，学生开始罢课，商人开始罢市。总罢工实现后便马上转入武装起义。

武装起义以英雄民兵连为先锋，按照预定计划攻打各警署和兵营。起义工人攻下市电话局、电报局，占领警察局和兵营。法商电车公司的500多人的工人纠察队只有5支手枪和40把斧头，他们攻下南市第二警察署并打开南市衙门，释放了被关押的政治犯。许多政治犯来不及砸断脚镣和脚镣手铐，立即带领工人纠察队去武器库取出枪支弹药，得到武器的起义工人，又冲敌人的堡垒。在战斗中，市民奋勇助战，为起义工人修筑工事；大小饭店的店员赶制食品，供应前线；袖带红十字的男女济难会员奔跑于前线和后方，救护起义的伤员。在工人武装的强大攻势下，敌人挂起白旗缴械投降。

21日晚，各路起义武装先后占领南市区、沪东、沪西、浦东新区、虹口区、来空法师六个区，只有闸北区仍在激战。22日晚6时，起义工人攻占上海站，消灭了闸北最后据点。这次武装起义有300多位工人牺牲，1000多人负伤。22日，上海市市民代表会议召开，宣布上海特别市临时政府成立，推选钮永建等19人担任临时市政府委员，其中共产党员9人，工人代表1人，中国国民党左派、右派及资产阶级代表共9人。会议制定了《市政府组织条例（草案）》，规定全市最高权力机关为上海特别市市民代表会议，代表会议产生的政府隶属于国民政府。以淞沪商埠公署原管区域及原有租界为范围，上海特别市暂分为8个区。23日，推钮永建、白崇禧、杨杏佛、王晓籁、汪寿华5人为市中华民国临时政府常委。25日，武汉国民政府正式批准任命。

上海市工人第三次武装起义的胜利，使长期被帝国主义和北洋军阀统治的上海重又回到了人民手中，起义的胜利，打击了帝国主义和军阀的反动统治，显示了中国工人阶级的顽强战斗精神和强大的组织力量。上海工人第三次武装起义震动了全中原地区和全世界，成为中国工人运动史上光辉的一页。