小果雪兔子(学名:Saussurea simpsoniana)是
菊科风毛菊属的多年生草本植物,主要分布在
印度、
巴基斯坦、
尼泊尔以及中国大陆的
西藏自治区、新疆等地。它生长在海拔5,200米至5,700米的高山流石滩。
茎高2-12厘米,密被白色绵毛,基部被
褐色枯存叶柄。基生叶和茎下部叶线形,长2-6厘米,宽3-6毫米,先端急尖,边缘具齿或浅羽裂,基部渐狭,两面密被白色绵毛;最上部叶小,全缘或有疏齿,常下反。
头状花序多数,密集于膨大的茎端呈半球形;总苞狭筒形,长10-12毫米,总苞片长圆形或
披针形,先端渐尖,紫红色,被毛;小花长达1.5厘米,冠毛褐色,内层基部连合较高。
瘦果黑色,长2-3毫米。
2.材料处理:将采集的小果雪兔子种子先经过低温处理(放在冰箱中-20℃,48小时),然后取出经70%
乙醇消毒10秒至1分种,0.1%
氯化汞消毒5-15分种,无菌水洗4-5次,每次2-3分种。
3.无菌苗的获得:将高压消毒的滤纸片放入1/2MS附加6-BA0.5毫克/升,
琼脂5.5克/升,pH5.8的无
蔗糖的培养基中,然后将消毒的种子接种于无蔗糖培养基上,放至培养箱中培养,温度控制在15-20℃,7天后萌发出无菌幼苗。
4.诱导愈伤组织:将培育出的无菌苗胚轴和
子叶切成数段,接种于基本培养基MS+6-BA0.2毫克/升+NAA2.0毫克/升。蔗糖30克/升,琼脂55克/升,pH5.8,培养条件是温度为18-20℃,光照时间每日14-16小时,光照强度1500-2000
勒克斯的培养基上生长速度较快,质量增加较多。
5.愈伤组织芽的分化:以20℃培养为对照,将培育出的愈伤组织经低温4℃处理培养7天后,选用MS基本培养基+
蔗糖30克/升、
琼脂5.5克/升、pH5.8、
水解乳蛋白250毫克/升,以浓度的6-BA2.0毫克/升与NAA0.2毫克/升搭配,培养条件为50毫升三角瓶内含20毫升固体培养基,接种愈伤组织鲜重(0.25±0.2)克,温度为18-20℃,放置光照培养箱中,光照时间每日14-16小时,光照强度1500-2000
勒克斯,每隔20天继代一次。
6.再生芽继代培养和生根培养:将再生的
丛生芽从愈伤组织上取下,然后接种于3/4MS基本培养基中,附加水解乳蛋白250毫克/升+6-BA2.0毫克/升+NAA0.2毫克/升,pH为5.8,
琼脂5.5克/升,
蔗糖30克/升。
接种后于光照培养箱中培养,培养箱温度(昼/夜)控制在20/18℃。继代培养生长状态良好,将2-3厘米长的幼苗,转移到IAA0.5毫克/升+活性炭0.5%的1/2MS固体培养基上,20天即可从茎基部生根,生根率74%。
小果
雪兔子与雪兔子相近,但植株
矮小症,叶线形,两面密被绵毛,内层冠毛基部连合较高,瘦果小而不同。