1990年，周小倩考入
上海戏剧学院导演系。1994年，从上海戏剧学院导演系毕业；同年，成为上海青年话剧团演员。
1995年，成为上海话剧艺术中心演员、导演 ；同年，参演个人首部话剧《
苍天在上》。
1996年，参演并兼任话剧《商鞅》的副导演 。2000年，执导个人首部话剧《难忘今宵》，该剧获得上海市小剧节目汇演优秀剧目奖 ；同年，担任话剧《正红旗下》的助理导演 。2001年，担任话剧《女人的最后一天》的助理导演 。
2002年，担任话剧《
好爹好娘》的助理导演 。2003年，执导话剧《
我和春天有个约会》；同年，担任话剧《老式喜剧》的助理导演 。2004年，参演并兼任上话版话剧《金锁记》的副导演 ；同年，由其执导的话剧《疯花梦醉星期天》在上海话剧艺术中心戏剧沙龙上演，该剧由
刘婉玲、
宋忆宁、
李宗华联袂主演。
2005年，执导话剧《蛋白质女孩》 ；同年，执导由
尹铸胜、宋忆宁共同主演的话剧《李亚子》 。2006年，执导由
郝平、
秦旋等联合主演的话剧《欢乐复活节》 。2007年，为迎接党的十七大召开，执导的话剧《激情东海》在宛平剧场首演 ；同年，周小倩获得第6届
中国话剧金狮奖导演奖 。
2008年12月20日至2009年1月6日，执导的话剧《中国式婚礼》在上海话剧艺术中心上演 ；同年，执导由
温阳 、
于毅、
马青莉联袂主演的音乐剧《马路天使》；随后，执导话剧《借我一个维塔斯》，该剧改编自肯·路德维格的作品《借我一个男高音》 。
2009年，执导的话剧《甲申记》在上海话剧艺术中心首演，该剧由
姚远改编 ；8月5日，由其执导的话剧《乱套了》在
安福路艺术剧院公演 。2010年，执导由
谢承颖、
孙艺洲合作主演的人物传记话剧《
钱多多嫁人记》 ；同年，参演话剧《意外来客》；4月7日，执导的复排话剧《
爱在春天》在
保利剧院上演 ；随后，执导话剧《
风声》。
2011年，执导由
江一燕、
郭彤彤搭档主演的话剧《
七月与安生》 。2012年，执导由
张璐、
徐漫蔓共同主演的话剧《
钢的琴》，该剧讲述了一位钢厂下岗工人为了女儿的音乐梦想而不断艰苦努力，最后通过身边朋友的帮助用钢铁为女儿打造出一架钢琴的故事 ；同年，执导由
谢承颖、
李超合作主演的话剧《钱多多备嫁记》 ；此外，还执导了话剧《
光荣日》。
2013年5月17日至5月26日，由其执导的话剧《志摩归去》在上海
艺海剧院上演 。2014年，执导由
童蕾主演的话剧《香水》；同年，执导并主演复排话剧《守岁》。2015年，执导的音乐剧《你是我的孤独》在上海首演，该剧讲述了
王洛宾创作歌曲的故事 。2016年，执导话剧《紫荆树下》；同年，执导的话剧《异乡人》在上海话剧艺术中心上演
2021年4月2日，执导的话剧《
长恨歌》在上海话剧艺术中心·艺术剧院上演。11月12日，执导的话剧《
向阳而生》在上海话剧艺术中心公演。
2022年3月10日至27日，执导的
音乐剧专业《I LOVE YOU...》在上海话剧艺术中心·D6空间上演。11月11日，据封面新闻消息，执导的音乐剧《
隐秘的角落》将于11月12日、13日在
四川大剧院连演两场。
周小倩以擅长驾驭女性题材闻名，她是一个精力旺盛的导演，排练场上的她会时不时地扯着大嗓门吆喝两声，还会像弹簧似的跳起来，亲自给演员示范。而且，她还具备开朗幽默的气质，擅长在舞台上营造温馨浪漫的气氛和热闹饱满的场面。在话剧《
七月与安生》中，她以细腻的剧作构思，深刻刻画出原作故事中两女一男之间的情感纠葛，给观众留下心灵的启发，使整部剧既符合
安妮宝贝的原作精神，又具有舞台观赏性。（《
青年报》、《
新民晚报》、制作人王德顺、
新浪娱乐、《
长沙晚报》综合评）。